众所周知流式细胞术中固定和破膜是两个步骤，固定和破膜时需要注意的几点细节：

关于固定

涉及胞内染色的步骤都需要先固定，不然我们的细胞就像气球被扎，破裂了。那么只做表面染色还需要固定吗？也是会有的，例如我们去平台上机，约不到仪器或需要等待上机时间；另外，需要考虑样本的安全性，也就是需要固定剂的帮助。

关于破膜

跨膜蛋白的胞内段检测，大家不要以为CD Marker都是表面染色哦，有些跨膜蛋白会因为胞外没有合适的位点，对应的抗体是设计在胞内段的。还有大家熟悉的胞浆中的蛋白检测，细胞核内的蛋白、核酸的检测，另外信号通路磷酸化的蛋白检测。

固定破膜对细胞表面marker有多大影响？

细胞固定/破膜后往往会对抗体的标记有影响，但是不同的克隆号，影响的程度有所差别，在此小亿总结了一些常用抗体克隆号受细胞固定/破膜影响的比较分析，以供大家实验参考，希望可以帮助到您的实验顺利开展。

相对染色：（+++）最亮，（++）较亮，（+）亮，（+/-）弱，（-）阴性

请注意带*号的克隆，表明长时间固定不利于染色。

 

亿鸣复兴流式细胞(FCM)检测服务技术优势

亿鸣复兴生物具有多年流式检测经验，在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性；

亿鸣复兴生物储备有多种流式检测常用试剂，大大节约购买试剂的等待时间和实际费用；

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